在新冠疫苗還沒全面普及的時(shí)期,各位粉絲是否面臨過被核酸檢測支配的恐懼呢?
醫(yī)務(wù)工作者2周一次鼻拭子/咽拭子已經(jīng)成為常態(tài),淚眼婆娑的時(shí)候不一定是難過或感動(dòng),還可能是剛做完核酸檢測。
在這個(gè)“邪惡”的小棉簽背后,就是在疫情期間發(fā)揮巨大作用的核酸檢測。而作為核酸檢測重要的支撐,PCR技術(shù)再一次大放異彩。
PCR實(shí)驗(yàn)中,你遇到過這樣的問題嗎?
•反應(yīng)不完全/反應(yīng)終體積差異大
•條帶強(qiáng)弱不同
•樣品凝膠回收不夠
•拷貝數(shù)差異巨大
如果你曾經(jīng)遇到過類似的問題,
那么你需要注意的是:PCR管上機(jī)前你離心了嗎?
要知道,PCR反應(yīng)體系小,以10-50μL居多,PCR儀為底部加熱模式,如果反應(yīng)混合液混勻后發(fā)生掛壁現(xiàn)象,用手甩小體積液體根本下不來!
這就很容易造成反應(yīng)不完全或者反應(yīng)終體積差異大,最終影響實(shí)際反應(yīng)條件的一致性和結(jié)果的可重復(fù)性:例如條帶強(qiáng)弱怎么不同、樣品凝膠回收又不夠、拷貝數(shù)差很多……
PCR管體積通常是200μl,又有單管、排管、96孔板之分,并不是我們常用的ep管規(guī)格,在這種情況下,要怎么離心呢?